Hogan, F. S., Krishnegowda, N. K., Mikhailova, M., & Kahlenberg, M. S. (2007). Flavonoid, silibinin, inhibits proliferation and promotes cell-cycle arrest of human colon cancer. Journal of Surgical Research, 143(1), 58-65.

CONTEXTO: Se ha demostrado que los extractos antioxidantes de la planta de cardo mariano ( Silybum marianum ) tienen efectos antiproliferativos en varios tipos de tumores. La silibinina es el componente activo primario aislado del extracto crudo de semillas, la silimarina . Se ha utilizado como un suplemento dietético para la hepatoprotección durante más de 2000 años. Se ha demostrado que la silibinina es segura en múltiples modelos animales y no ha tenido eventos adversos significativos en estudios en humanos.

OBJETIVO: Investigamos el potencial de este flavolignano no tóxico para inhibir la proliferación del cáncer de colon humano .

MATERIALES Y MÉTODO: Se estudiaron tres líneas celulares bien caracterizadas, Fet, Geo y HCT116. El ensayo de viabilidad celular MTT se realizó para estudiar el efecto de la silibinina en la proliferación. El análisis del clasificador celular activado por fluorescencia (FACS) se usó para determinar los efectos de la silibinina en el ciclo celular y la apoptosis . La tinción con 4 ‘, 6′-diamidina-2’-fenilindol (DAPI) con microscopía confocal se utilizó para confirmar morfológicamente estos resultados. Se midieron los niveles de escisión y expresión de poli ADP-ribosa polimerasa (PARP) de p21 , p27, ciclinas B1 / D1 y CDK-2. Ciclooxigenasa-2(COX-2) también se midieron los niveles. Los experimentos se realizaron por triplicado y se informaron como valores medios con errores estándar. Las medias se contrastaron usando análisis de varianza con la corrección de Dunnet para pruebas múltiples. Todas las pruebas estadísticas fueron de dos lados con un nivel de significación del 5%.

RESULTADOS: El ensayo MTT reveló un fuerte efecto inhibidor dependiente de la dosis. El tratamiento con 75 μg / ml resultó en una inhibición del 50% de la viabilidad celular (IC-50) en las líneas Fet y Geo a las 72 h. Se obtuvo una dosis de CI50 de 40 ug / ml en HCT116, una línea celular pobremente diferenciada, a las 72 h. El análisis FACS demostró una detención del ciclo celular estadísticamente significativa en todas las líneas celulares. Se observaron detenciones de fase G 2 -M en líneas celulares Fet y Geo ( P <0,001) y una detención de G1 en HCT116 ( P = 0,005). Los aumentos triviales en las tasas apoptóticas tempranas (2% a 3%) para Geo y HCT116 se observaron en el análisis FACS a través del yoduro de anexina V-propidiotécnica ( P <0.05), pero no se observó evidencia de apoptosis en Western blot para escisión de PARP o DAPI . Los niveles de ciclina B1 / D1 y CDK-2 fueron inhibidos. Se observó una mayor expresión de inhibidores del ciclo celular, p21 o p27, y no hubo efecto sobre la expresión de COX-2.

CONCLUSIONES: La silibinina inhibe significativamente la proliferación mediante la detención del ciclo celular mediante la inhibición de la actividad del promotor ciclina-CDK. A pesar de su perfil antioxidante, no hay efecto sobre la expresión de COX-2. La apoptosis no parece aumentar mucho en las líneas celulares de cáncer de colon humano Fet, Geo y HCT116. Más bien, la inhibición de las proteínas reguladoras del ciclo celular juega un papel fundamental en el mecanismo de acción de la silibinina, y esto puede servir como base para el uso combinado con quimioterapéuticos convencionales.