Zhang, X. M., Chen, J., Xia, Y. G., & Xu, Q. (2005). Apoptosis of murine melanoma B16-BL6 cells induced by quercetin targeting mitochondria, inhibiting expression of PKC-α and translocating PKC-δ. Cancer chemotherapy and pharmacology, 55(3), 251-262.

PROPÓSITO: En nuestro estudio anterior, se descubrió que la quercetina inducía la apoptosis de las células B16-BL6 de melanoma murino. El mecanismo celular y molecular de la apoptosis inducida por quercetina se investigó en el presente estudio.

MÉTODOS: La morfología nuclear se determinó por microscopía de fluorescencia. La fragmentación del ADN se analizó por electroforesis y se cuantificó por el método de la difenilamina. El potencial transmembrana de las mitocondrias se midió por citometría de flujo. Bcl-2, Bcl-X L , PKC-α, PKC-β y PKC-δ se detectaron mediante transferencia Western. La actividad de caspasa se determinó por espectrofotometría.

RESULTADOS: La quercetina indujo la condensación de los núcleos de las células B16-BL6 en un patrón dependiente de la dosis, tal como lo visualiza Hoechst 33258 y la muerte por yoduro de propidio. Phorbol 12-miristato 13-acetato (PMA), un activador de PKC, mejoró significativamente la apoptosis inducida por quercetina, mientras que la doxorrubicina, un inhibidor de PKC, disminuyó notablemente. Tanto la PMA como la doxorrubicina mostraron un efecto constante sobre la fragmentación del ADN nuclear causado por varias dosis de quercetina.

La quercetina, dependiente de la dosis, condujo a la pérdida del potencial de membrana mitocondrial, que también se reforzó o antagonizó significativamente por PMA y doxorrubicina, respectivamente. Además, la PMA mostró refuerzo, mientras que la doxorrubicina mostró una antagonización significativa de la disminución mediada por quercetina en la expresión de Bcl-2.

La quercetina promovió la actividad caspasa-3 de una manera dependiente de la dosis, que también estaba regulado por PMA y doxorrubicina con un patrón similar al observado en su efecto sobre la apoptosis, el potencial de membrana mitocondrial y la expresión de Bcl-2, pero ninguno de estos se vio directamente afectado por PMA y doxorrubicina. El ácido graso libre y la clorpromazina, un activador e inhibidor de la PKC, respectivamente, no interfirieron con estos efectos de la quercetina. Las células B16-BL6 expresaron PKC-α, PKC-β y PKC-δ.

La quercetina inhibió de forma dependiente de la dosis la expresión de PKC-α pero no la de PKC-β y PKC-δ. La doxorrubicina bloqueó casi por completo el efecto de la quercetina sobre la expresión de PKC-α. La quercetina también participó en la translocación de PKC-δ desde el citosol al núcleo. PMA mejoró el efecto de la quercetina en la translocación de PKC-δ. potencial de membrana mitocondrial y expresión de Bcl-2, pero ninguno de estos se vio directamente afectado por PMA y doxorrubicina. El ácido graso libre y la clorpromazina, un activador e inhibidor de la PKC, respectivamente, no interfirieron con estos efectos de la quercetina. Las células B16-BL6 expresaron PKC-α, PKC-β y PKC-δ.

CONCLUSIONES: Estos resultados indican que la quercetina indujo la apoptosis de las células B16-BL6 de melanoma murino al dañar sus mitocondrias, aumentar la actividad de la caspasa-3, inhibir la expresión de Bcl-2 y PKC-α e inducir la translocación de PKC-δ. La doxorrubicina inhibió estos efectos de la quercetina al bloquear la disminución de la expresión de PKC-α inducida por la quercetina, mientras que la PMA aumentó estos efectos al mejorar la translocación de PKC-δ inducida por la quercetina.