Duthie, S. J., & Hawdon, A. (1998). DNA instability (strand breakage, uracil misincorporation, and defective repair) is increased by folic acid depletion in human lymphocytes in vitro. The FASEB Journal, 12(14), 1491-1497. 

OBJETIVO: El ácido fólico es esencial para la síntesis y reparación del ADN. Estudiamos los efectos de la depleción de folato en la estabilidad del ADN en linfocitos humanos normales in vitro. 

MATERIALES Y MÉTODO: La rotura del filamento de ADN, la incorporación errónea de uracilo, el daño oxidativo de la base del ADN y la capacidad de reparación del ADN se determinaron usando variantes del ensayo del cometa (electroforesis en gel de células individuales). La proliferación de linfocitos se midió como un indicador de la replicación normal. Los linfocitos aislados de sangre venosa humana se estimularon para que crecieran en medio completo que contenía ácido fólico (1 ng / ml-2 μg / ml) o medio deficiente en ácido fólico durante hasta 10 días. Las células preparadas para el análisis de cometas se trataron con la enzima reparadora de ADN bacteriana endonucleasa III para determinar el nivel de pirimidinas oxidadas en el ADN de los linfocitos o con la ADN glucosilasa del uracilo, que detecta el uracilo incorporado incorrectamente. Se midieron el número de células y la viabilidad. 

RESULTADOS; El ADN de linfocitos humanos normales contenía cantidades detectables de uracilo incorporado incorrectamente (estimado como aproximadamente 1000 por célula). La rotura del filamento de ADN y la incorporación errónea de uracilo aumentaron de manera dependiente del tiempo y de la concentración después de que los linfocitos se cultivaron con cantidades decrecientes de ácido fólico. Se indujo daño en el ADN a concentraciones de ácido fólico observadas rutinariamente en el plasma de la población humana (1-10 ng / ml). Los linfocitos cultivados en condiciones deficientes en folatos no crecieron normalmente en comparación con las células de control. Sin embargo, todos los linfocitos se mantuvieron viables según lo medido por exclusión con azul tripán. Las células privadas de folato no pudieron reparar eficientemente el daño oxidativo del ADN inducido por el peróxido de hidrógeno. La inhibición de la reparación fue máxima después de 8 días en cultivo. El suministro de folato no tuvo efecto sobre el nivel de pirimidinas oxidadas en el ADN de los linfocitos, incluso después de 10 días en cultivo, lo que sugiere que la deficiencia de folato aumenta la incorporación incorrecta de uracilo de forma relativamente específica. 

CONCLUSIÓN: Estos resultados in vitro ayudan a determinar el (los) mecanismo (s) mediante los cuales el ácido fólico mantiene la estabilidad del ADN. La inestabilidad del ADN (rotura de filamentos, mala incorporación del uracilo y reparación defectuosa) aumenta con la depleción in vitro del ácido fólico en los linfocitos humanos.